然后关闭色谱仪主机检测器开关（目的是延长检测器寿命）原油先物指数4.应用缓冲溶液时，做完样品后应立刻用去离子水冲洗管途及柱子一小时，然 后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以弥漫洗去离子。对付柱塞杆 外部，做完样品后也必需用去离子水冲洗20ml以上。

　　5.长时辰不必仪器，应当将柱子取下用堵头封好保全，细心不行用纯水保全柱子，而应当用有机相(如甲醇等)，由于纯水易长霉。

　　8.窒碍导致压力太大，按预柱混淆器中的过滤器管途经滤器单向阀检讨 并洗涤。洗涤方式；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放正在异丙醇中央用超声波清 洗；⑧用10％稀硝酸洗涤。

　　10.若是进液管内不进液体时，要应用打针器吸液：广泛正在输液前要实行滚动相 的洗涤。

　　12.更调滚动相时应当先将吸滤头个别放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的 滚动相中。更调无互溶性的滚动相时要用异丙醇过渡一下。

　　液相色谱柱应用体验说色谱柱正在应用前，最好实行柱的本能测试，并将结果保全起来，行为从此评判柱本能转变的参考。但要细心：柱本能或者因为所应用的样品、滚动相、柱温等要求的差别而有所分别；别的，正在做柱本能测试时是遵守色谱柱出厂呈报中的要求实行(出厂测试所应用的要求是最佳要求)，惟有云云，测得的结果才有可比性。1、样品的前处罚：a、最好应用滚动相融化样品。

　　2、滚动相的配制： 液相色谱是样品组分正在柱填料与滚动相之间质料交流而抵达分辨的宗旨，所以央浼滚动相具备以下的特色：a、滚动相对样品具有必然的融化才智，担保样品组分不会浸淀正在柱中(或长时辰保存正在柱中)。b、滚动相具有必然惰性，与样品不发作化学反响(格外景况除外)。c、滚动相的黏度要尽量小，以便正在应用较长的阐明柱时能取得好的分辨成果；同时消浸柱压降，耽误液体泵的应用寿命(可行使提升温度的方式消浸滚动相的黏度)。

　　d、滚动相的物化性子要与应用的检测器相符合。如应用UV检测器，最好应用对紫外吸取较低的溶剂配制。

　　f、正在滚动相配制好后，必然要实行脱气。除去融化正在滚动相中的微量气体既有利于检测，还可能防守滚动相中的微量氧与样品产生功用。

　　3、滚动相流速的拔取： 因柱效是柱中滚动相线性流速的函数，应用分别的流速可取得分别的柱效。对付一根特定的色谱柱，要找寻最佳柱效，最好应用最佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速平常拔取1ml／min，对付内径为4.0mm柱，流速0.8ml／min为佳。 膺选用最佳流速时，阐明时辰或者耽误。可采用改造滚动相的洗涤强度的方式以缩短阐明时辰(如应用反相柱时，可相宜弥补甲醇或乙腈的含量)。 细心：

　　a．因为甲醇便宜，对付反相柱引荐应用甲醇体例(必需应用乙腈的局面除外)。

　　b．对付正相柱引荐应用沸程为30-60℃的石油醚或提纯后的己烷作滚动相，没有提纯的己烷不得应用。用水最好应用超纯水(电阻率大于18兆欧)，去离子水及双蒸水中含有酚类杂质，有或者影响阐明结果。

　　c．含水滚动相最*正在尝试前配制，特别是夏季应用缓冲溶液行为滚动相不要止宿。最好参加叠氮化钠，防守细菌滋长。

　　e．应用HPLC级溶剂配制滚动相，应用适合的滚动相可耽误色谱柱的应用寿命，提升柱本能

　　高效液相色谱仪应用时常睹阻碍的断定及处理方式诊状或者的情由及处理方式(一)保存时辰转变1.柱温转变 柱恒温，须要时需摆设恒温箱

　　4.柱内烧结不锈钢失效 更调烧结不锈钢,加正在线.进样器损坏 更调进样器转子

　　3.硅羟基功用 加三乙胺,用碱致钝化柱弥补缓冲液或盐的浓度消浸滚动相PH值,钝化样品

　　6.死体积或柱外体积过大 相连点降至最低,对全数相连点作适合调解,尽或者采用细内径的相连管

　　液相色谱仪应用操作规程液相色谱仪应用操作规程总流程：超纯水冲洗柱——滚动相分辨样品——超纯水冲洗柱 ——纯乙睛保全柱1． 电源打定

　　翻开稳压器（ ）电源开合，须待电压指示至 220V 后，本事开启其他相合修筑。

　　A 液 0.1%三氟乙酸 （三氟乙酸 1ml，超纯水 999ml）室温保全

　　若是，管道中气泡较众，可通过弹击管道，排出气泡，并逆时针挽救脱气泵活塞使其松动，用打针管于滚动相出口的塑料管末了抽吸至管道内气泡排出统统。操作时，咱们广泛仍然翻开了脱气机（气泡吃紧影响分辨成果，于是瞻仰管道中液体是否有气泡特殊紧张。）

　　a.双击 WIN-95 操作界面中左下角 Instrument 1 online 图标，进入 HP1100 管事站软件操作界面。单击管事站操作界面上方 Run control 菜单，不才拉菜单中找到 Sample Info 子菜单，单击。正在 Sample Info 音讯框内界说操作家、样品前缀及编号、保全途径等参数。正在保全途径项下，将可界说子目次永别输入操作家拼音缩写，以便利检索时互不骚扰。

　　b.守候管事站操作界面中泵、柱温箱、检测器各指示图标由灰色转折为绿色后，单击泵、检测器各图标可从其各自弹出的菜单中设定滚动相各溶剂比例、流速等。

　　（2） A 液设备为 100%，运转 15-30 分钟（宗旨是色谱柱的预均衡），瞻仰基线走势，基线应为直线;键可将基线调至零点。待基线 分钟（此时乙腈本质浓度为 60%）

　　（4） 正在 A 液冲洗同时实行进样环的冲洗：用 500ul 的针样打针器，正在 load 形态，注入超纯水 500ul。（屡次三次，假若 20ul 进样环，则参加 20ul 以上，众余的水可废液管流出。广泛同雷同品上样 30 次后应冲洗进样环，若是分别样品，最好，每次上样前均实行冲洗。）

　　（5） 接收必然量可直接进样的样品溶液（上样液最好用滤器滤过），将进样阀逆时针旋至Load 档，将进样针从进样孔处水准推入，按进样器活塞将样品溶液打针入进样环后，立刻将进样阀顺时针宗旨旋至 Inject 档，与此同时，数据下手自愿收罗。

　　（6） 此时样品阐明仍然实现。正在 HP1100 主操作界面的检测器图标，封闭检测器，然后封闭色谱仪主机检测器开合（宗旨是耽误检测器寿命）。将 B 通道调为 0，A 通道调为 100%，即 A 液冲洗色谱柱约 10-30min。用 A 液续冲洗色谱柱约 10-30m（宗旨是冲出柱内残留的杂质）

　　（7） A 通道换为 C 通道（100%乙腈）续冲洗色柱约 10-30min。（宗旨厉重为包庇柱）

　　电脑将自愿收罗并保全数据，终止运转后，将自愿弹出数据框，或者可通过 DATA ANALYSIS菜单，调出原料。

　　正在 HP1100 的主操作界面上永别单击封闭泵、检测器图标，或通过菜单封闭 。然后，单击HP1100 的主操作界面右上方X，退出 Instrument 1 online 措施，返回至 WIN-95 操作界面。单击左下角Start菜单，单击Shut down,守候合机，待显示Restart提示后，按电脑主机电源键，封闭电脑主机及显示器。将全数应用仪器用布盖好。封闭排气扇、空调与稳压器开合。

　　记实当天的仪器应用景况于指定记实本上，蕴涵仪器应用起止时辰与显示题目的处理计划，并签上操作家的名字.

　　液相色谱仪应用时要特殊的细心。应用卡套柱时，两头的卡套适时刻相连正在柱芯上。不管您是均衡色谱柱或是洗涤，任何时刻都不行将卡套取下来，不然会酿成填料的流失。液相色谱柱应用细心：卡套柱的装置（加预柱）

　　反相色谱柱正在过程出厂测试后是保全正在乙腈/水中的。请必然确保您所应用的滚动相和乙腈/水互溶。因为色谱柱正在积蓄或运输经过中或者会干掉，所以正在用滚动相阐明样品之前，应应用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈均衡色谱柱；若是您所应用的滚动相中含有缓冲盐，应细心用纯水过渡。

　　硅胶柱或极性色谱柱正在过程出厂测试后是保全正在正庚烷中的。若是该色谱柱必要应用含水的滚动相，请正在应用滚动相之前用乙醇或异丙醇均衡

　　均衡经过中，将流速平缓地提升用滚动相均衡色谱柱直到得回巩固的基线（缓冲盐或离子对试剂度若是较低，则必要较长的时辰来均衡）

　　实行色谱柱再生时，应应用一个谦价的泵，咱们提议最好不应用您的高效液相色谱仪上的泵。

　　正在对NH2改性的色谱柱实行再生时，因为NH2或者成铵根离子的事势存正在，所以应当正在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液统统流出。 若是简便的有机溶剂/水的处罚弗成能统统洗去硅胶外貌吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗特殊有用。

　　1．应用预柱包庇阐明柱（硅胶正在极性滚动相/离子性滚动相中有必然的融化度）

　　2．公众半反相色谱柱的pH巩固限制是2－7.5，尽量不突出该色谱柱的pH限制

　　5．若是应用极性或离子性的缓冲溶液作滚动相，应正在尝试完毕柱子冲洗清洁，并保全大乙腈中

　　1、色谱弧线chromatogram）：色谱柱流出物通过检测器体例时所发作的相应信号对时辰或滚动相流出体积的弧线图，或者通色谱图（ch过相宜的方式瞻仰到的纸色谱或薄层色谱黑点、谱带的散布图。

　　2、（色谱）峰（chromatographic peak）：色谱柱流出组分通过检测器体例时所发作的相应信号的微分弧线、峰底（peak base）：峰的开始与尽头之间的相连的直线、峰高（h ，peak height）：色谱峰最大值点到峰底的间隔。5、峰宽（W ，peak width）：正在峰两侧拐点位置作切线与峰底订交两点的间隔。6、半岑岭宽（W h/2 ，peak withd at half height）：通过峰高的中点作平行于峰底的直线，此直 线 与峰两侧订交两点之间的间隔（图1 中的HJ）。7、峰面积（A ，peak area）：峰与峰底之间的面积（图1中的CHEJDC）。8、拖尾峰（tailing peak）：后沿较前沿平缓的错误称的峰。

　　9、前伸峰（leading peak）：前沿较后沿平缓的错误称的峰。（又叫伸舌峰、前延峰）

　　10、假峰（ghost peak）：除组分平常发作的色谱峰外，因为仪器要求的转变等情由而正在谱图上显示的色谱峰，即并非由试样所发作的峰。这种色谱峰并不代外简直某一组分，容易给定性、定量带来偏差。（又叫鬼峰）

　　11、畸峰（distrorted peak）：式样错误称的色谱峰， 前伸峰、拖尾峰都属于这类。

　　12、反峰（negative peak）：也称倒峰、负峰，即出峰的宗旨与广泛的宗旨相反的色谱峰。

　　色谱柱确凿切应用和庇护至极紧张，稍有失慎就会消浸柱效、缩短应用寿命以至损坏。正在色谱操作经过中，必要细心下列题目，以庇护色谱柱。

　　①避免压力和温度的快速转变及任何呆板颤栗。温度的倏忽转变或者使色谱柱从高处掉下都市影响柱内的填充境况；柱压的倏忽升高或消浸也会激动柱内填料，所以正在调撙节速时应当平缓实行，正在阀进样时阀的转动不行过缓（如前所述）。

　　②.应慢慢改造溶剂的构成，万分是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改造为全体是水，反之亦然

　　③平常说来色谱柱不行反冲，惟有坐褥者指明该柱可能反冲时，才可能反冲除去留正在柱头的杂质。不然反冲会疾速消浸柱效。

　　④拔取应用适宜的滚动相（特别是pH），以避免固定相被摧残。有时可能正在进样器前面相连一预柱，阐明柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使滚动相正在进入阐明柱之前预先被硅胶饱和，避免阐明柱中的硅胶基质被融化。

　　⑥通常用强溶剂冲洗色谱柱，废除保存正在柱内的杂质。正在实行洗涤时，对流途体例中滚动相的置换应以相混溶的溶剂慢慢过渡，每种滚动相的体积应是柱体积的20倍把握，即通例阐明必要50~75ml。

　　下面罗列极少色谱柱的洗涤溶剂及依次，行为参考：硅胶柱以正已烷（或庚烷）、二氯甲烷和甲醇递次冲洗，然后再以相反依次递次冲洗，全数溶剂都必需厉酷脱水。甲醇能洗去残留的强极性杂质，已烷使硅胶外貌从头活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯仿）递次冲洗，再以相反依次递次冲洗。若是下一步阐明用的滚动相不含缓冲液，那么可能省略结果用水冲洗这一步。一氯甲烷能洗去残留的非极性杂质，正在甲醇（乙腈）冲洗时反复打针100~200l四氢呋喃数次有助于除去强疏水性杂质。四氢呋喃与乙腈或甲醇的混淆溶液能除去类脂。有时也打针二甲亚砜数次。另外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1%）梯度洗脱能除去卵白质污染。阳离子交流柱可用稀酸缓冲液冲洗，阴离子交流柱可用稀碱缓冲液冲洗，除去交流本能强的盐，然后用水、甲醇、二氯甲烷（除去吸附正在固定相外貌的有机物）、甲醇、水递次冲洗。

　　⑦保全色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防守溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲溶液留正在柱内静置止宿或更长时辰。

　　⑧色谱柱应用经过中，若是压力升高，一种或者是烧结滤片被窒碍，这时应更调滤片或将其取出实行洗涤；另一种或者是大分子进入柱内，使柱头被污染；若是柱效消浸或色谱峰变形，则或者柱头显示塌陷，死体积增大。正在后两种景况产生时，小心拧开柱接头，用清白小钢将柱头填料取出1~2mm高度（细心把被污染填料取净）再把柱内填料整平。然后用相宜溶剂潮湿的固定相（与柱内相通）填满色谱柱，压平，再拧紧柱接头。云云处罚后柱服从取得改良，然则很难复原到新柱的水准。柱子失效广泛是柱端个别，正在阐明柱前装一根与阐明柱相通固定相的短柱（5~30mm），可能起到包庇、耽误柱寿命的功用。采用包庇柱会吃亏必然的柱效，这是值得的。 广泛色谱柱寿命正在确切应用时可达2年以上。以硅胶为基质的填料，只可正在pH2~9限制内应用。柱子应用一段时辰后，或者有极少吸附功用强的物质保存于柱顶，万分是极少有色物质更易看清被吸着正在柱顶的填料上。新的色谱柱正在应用一段时辰后柱顶填料或者塌陷，使柱效低浸，这时也可补加填料使柱效复原。每次管事完后，最好用洗脱才智强的洗脱液冲洗，比方ODS柱宜用甲醇冲洗至基线均衡。当采用盐缓冲溶液作滚动相时，应用完后使用无盐滚动相冲洗。含卤族元素（氟、氯、溴）的化合物或者会腐化不锈钢管道，不宜长久与之接触。装正在HPLC仪上柱子如欠亨常应用，应每隔4~5天开机冲洗15分钟。

　　岛津液相操作规程一、开机操作规程1. 开机按Power键，按以下依次递次开启HPLC体例各修筑的电源：总电源泵柱温箱2. 脱气将吸滤头永别放入滚动相中，挽救排液阀至180度，启动键板上的Purge键，排液1~2min；再按一次Purge键撒手冲洗操作，合紧排液阀。3. 设定参数按Func键递次设定仪器参数：流速（或压力）、压力最大限、压力最小限。当屏幕显示区闪灼时，提示可能输入数值，按Enter键确认。正在A泵面板上，按Conc键，依据滚动比拟例，设备B泵比例。4. 启动流速先按CE键显示初始屏幕，然后按一下Func键，屏幕显示区闪灼，提示可能输入数值，按Enter键确认。以0.2ml/min的梯度逐渐升至所需流速（平常为1.0ml/min）。按Enter键之前，按CE键可能删除新设定的数值。5. 打定进样均衡10min后，开启检测器、打算机以及信号收罗器。待基线min），进样，即可实行等度洗脱。6. 梯度洗脱先遵守上述方式，设定好0时期滚动比拟例，然后按edit键编辑梯度措施，然后按Enter键，遵守以卑劣程实行设定。

　　键查找必要删除的措施，然后按del键即可。6.2切记：结果设定好措施，按CE

　　键返回原始形态，升至必要流速，等基线min），进样，立刻按run键，启动梯度措施。7.洗涤

　　起首封闭检测器，然后遵守参数方式，消浸流速，换用滚动相，简直实质睹细心事项。

　　10％的甲醇（乙腈）水溶液冲洗体例40~60min，然后再用100%甲醇冲洗体例10min，担保全数管途都正在100%甲醇溶液中。3.若是滚动相中含有离子对或缓冲盐，用

　　10％的甲醇（乙腈）水溶液冲洗体例60~90min，然后再用100%甲醇冲洗体例10min，担保全数管途都正在100%甲醇溶液中。4.若是管途长时辰不必，请用

　　1．管途经滤器的检讨及洗涤，吸滤头及正在线过滤器先用异丙醇超声5~15min，然后用甲醇超声

　　5~15min，随后用双蒸水超声5~15min，再用甲醇洗涤超声5~15min，装置。2．液相的洗涤，平常应用4周从此，将体例正在没有相连色谱柱的要求下，递次用甲醇、异丙醇、甲醇、

　　2.2 启动溶剂管制体例2.2.1干启动当溶剂的管途是干的或是必要更调溶剂时，正在“Status（1）”屏幕下，按[DirectFunction]，光标选中“Dry Prime”，按[Enter]，显示“Dry Prime”屏幕，按欲启动的溶剂管...

　　高效液相色谱仪确凿切应用与庇护。用进样阀来进样时，阀内的样品环是定量的，(平常阐明型进样阀的样品环体积为20ul)，因为进样时，打针到进样阀内的样品溶液正在样品环的管途中有径向的速率梯度(即管轴处...

　　超声脱气斗劲好，10-20 分钟的超声处罚对很众有机溶剂或有机溶剂/水混淆液的脱气 是足够了，此法不影响溶剂构成。6.每次做完样品后应当用融化样品的溶剂洗涤进样器。样品：滚动相小）的溶剂制备样品溶...

　　仪器操作与庇护：高效液相色谱仪原创 刘小备 小备化学与阐明 2021-12-01 08:10高效液相色谱仪操作庇护规程。3.4 编辑序列：从主界面左侧东西栏中点击Batch Processing→Batch Wizard进入序列编辑引导，...